【摘要】目的：克隆胞苷磷酸激酶（CMPK）基因，构建携带CMPK基因的原核表达载体，诱导表达具有活性的重组CMPK融合蛋白，获得转基因工程菌。方法：利用PCR法扩增大肠杆菌基因组DNA，纯化的PCR产物链接至pMD18-T载体上，得到重组质粒pMD18-T-CMPK，转化E.coli BL21（DE3）感受态细胞，酶切鉴定；分别用BamH I和XhoI限制性内切酶双酶切重组质粒pMD18-T-CMPK和pET28a（+）表达载体，连接后，转入E.coli BL21（DE3）感受态细胞，酶切鉴定。用终浓度1 mmol/L的IPTG诱导一定时间（3、6 h）后，取E.coli上清液做电泳分析。结果：所获CMPK基因全长为786 bp，编码含有262个氨基酸的蛋白，当A值为0.6~0.8时重组质粒经IPTG诱导3h后，相对分子质量约30000处出现目的蛋白条带，随着时间的延长，蛋白表达量增加不明显。结论：成功地克隆CMPK基因，表达了大肠杆菌BL21(DE3) 重组CMPK融合蛋白，为胞苷磷酸激酶进一步开发和应用奠定基础。