基金项目:重庆市自然科学基金资助(CSTC,2008BB5274;CSTC,2009BB5314)
【摘要】目的:构建hTERT(人端粒酶逆转录酶)调控相关miR-138慢病毒表达载体。方法:化学合成miR-138前体序列,连接到包含U6启动子及GFP(绿色荧光蛋白)报告基因的慢病毒载体pGCL-GFP中,获得重组质粒,经双酶切和测序鉴定后,与慢病毒包装质粒pHelper 1.0及pHelper 2.0共转染至HEK 293T细胞包装病毒,并对病毒进行鉴定。结果:双酶切和测序结果证实miR-138前体核苷酸链序列插入正确,包装的慢病毒滴度达7×107TU/ml;包装成功的慢病毒可有效增加感染细胞内miR-138的表达丰度,并可下调hTERT表达水平。结论:成功包装并鉴定人miR-138慢病毒表达载体。
陈 陵,熊晓峰,高 军,邹利全,张方征,王洪斌.负载hTERT调控相关miR-138慢病毒的包装及鉴定[J].现代医药卫生,2011,27(2):177-