人骨形态发生蛋白-9基因修饰SD大鼠骨髓间充质干细胞的建立研究
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基金项目:贵州省科研基金资助项目(黔科合J字LKZ〔2010〕03号)


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    【摘 要】 目的 建立人骨形态发生蛋白-9(BMP-9)基因转染SD大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),并观察其在细胞内的表达。 方法 采用全骨髓细胞贴壁法分离出BMSCs,利用流式细胞仪检测CD44、CD90、CD45、CD34细胞表面标记物;通过脂质体转染法将pDoubleEx-EGFP-BMP-9质粒、pDoubleEx-EGFP质粒转染入SD大鼠BMSCs,利用荧光显微镜、荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测BMP-9的转染效果。 结果 全骨髓贴壁培养法成功分离大鼠BMSCs,传代培养至第3代可获得较高纯度,CD44-FITC的阳性表达率为92.35%,CD90-FITC的阳性表达率为91.76%,CD34-PE的阳性表达率为2.68%,CD45-PE的阳性表达率为4.13%;荧光显微镜和倒置显微镜下观察,BMP-9基因修饰后细胞形态未发生变化;PCR检测发现pDoubleEx-EGFP-BMP-9转染组中大量表达BMP-9基因,是pDoubleEx-EGFP组的378 517.88倍;Western blotting结果显示,pDoubleEx-EGFP-BMP-9组中大量表达BMP-9蛋白,pDoubleEx-EGFP未见表达。 结论 全骨髓贴壁培养法可以成功分离BMSCs,BMP-9基因可以通过脂质体转染的方法转染入SD大鼠的BMSCs中并得到成功表达。

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引用本文

向晓波,周艳萌,蒋 练.人骨形态发生蛋白-9基因修饰SD大鼠骨髓间充质干细胞的建立研究[J].现代医药卫生,2017,33(6):801-

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