江苏省自然科学基础研究项目(18KJD36003);扬州市职业学院校级自然科学项目(2018ZR28)
目的构建表达人紧密连接蛋白18.2(CLDN18.2)的慢病毒载体,并通过慢病毒转导293T细胞获得稳定表达CLDN18.2的293T稳转细胞株。方法采用聚合酶链式反应(PCR)扩增目的基因,将其插入质粒pWPT,构建pWPT-CLDN18.2慢病毒包装质粒。采用PCR对重组质粒进行鉴定,对重组质粒进行慢病毒包装后转导293T细胞系,同时设立未转让质粒的293T细胞作为对照组,得到293T-CLDN18.2混合克隆细胞。检测转染后目的蛋白水平及单克隆细胞阳性率。结果经PCR鉴定,在700 bp处有一条清晰条带与目的基因大小相符。在25~35 kDa处有明显条带,与预期28.8 kDa相符。表达CLDN18.2单克隆细胞的阳性率为99.3%。结论该研究成功获得稳定表达人CLDN18.2的293T稳转细胞株,为下一步的单克隆抗体的制备奠定了基础。
王晓丽,彭建明,严慧深,江秀玲 △.构建CLDN18.2慢病毒载体及其稳转细胞株的建立[J].现代医药卫生,2024,40(21):3625-3628